小鼠白介素1β試劑盒操作原理

更新時間：2011-09-27 點擊次數(shù)：2443次

小鼠白介素1β試劑盒操作原理

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍： 96T

2.5ng/L-80ng/L

使用目的：

小鼠白介素1β試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白介素1β （IL-1β）含量。

實驗原理

小鼠白介素1β試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中小鼠白介素1β （IL-1β）水平。用純化的小鼠白介素1β （IL-1β）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白介素1β （IL-1β），再與HRP標記的白介素1β （IL-1β）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白介素1β （IL-1β）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中小鼠白介素1β （IL-1β）濃度。

小鼠白介素1β試劑盒操作步驟

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

80ng/L	5號標準品	150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
40ng/L	4號標準品	150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
20ng/L	3號標準品	150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
10ng/L	2號標準品	150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
5ng/L	1號標準品	150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月

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